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BD 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDB)正確儲存與使用指南

更新時間:2025-07-16      點擊次數:523

一、正確儲存方法

(一)儲存環境要求

BD 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDB)應儲存在干燥、陰涼、避光的環境中。過高的濕度可能導致培養基吸潮,影響其物理狀態和營養成分,增加微生物污染的風險;高溫環境會加速培養基中成分的分解和變質,破壞其營養結構,降低培養基的質量。而光照可能會使培養基中的某些成分發生光化學反應,影響微生物的生長和培養效果 。因此,建議將其放置在專門的藥品儲存柜中,儲存溫度控制在 2 - 8℃為宜,避免與易揮發、有腐蝕性的化學試劑存放在一起,防止交叉污染。

(二)包裝完整性檢查

在儲存過程中,要定期檢查 PDB 的包裝是否完整。瓶裝培養基需查看瓶蓋是否擰緊,有無裂縫或破損;袋裝培養基要檢查包裝是否密封,有無漏氣、破損現象。若發現包裝受損,應立即停止使用,因為包裝破損會使培養基暴露在外界環境中,容易受到微生物污染和水分散失,無法保證培養效果,使用這樣的培養基可能會導致實驗結果不準確或微生物培養失敗。

(三)保質期管理

嚴格遵守 PDB 的保質期規定,在保質期內使用。不同規格和批次的培養基保質期可能有所差異,使用前務必仔細查看產品標簽上的生產日期和保質期信息。臨近保質期的培養基,其性能可能會有所下降,使用時需謹慎評估。對于超過保質期的培養基,無論外觀是否有明顯變化,都不應再使用,以免影響實驗結果或微生物培養質量。

二、正確使用流程

(一)使用前準備

  1. 培養基的復溫:從冰箱中取出 PDB 培養基后,不要立即打開包裝進行使用,應先將其放置在室溫環境下一段時間,使其溫度回升至接近室溫。這樣做可以避免因溫度驟變導致培養基出現冷凝水,影響微生物接種和生長,同時也有利于后續的溶解和分裝操作。

  2. 實驗器具準備:準備好無菌的培養皿、接種環、移液槍、槍頭、酒精燈等實驗器具。所有器具都需經過嚴格的滅菌處理,如培養皿可采用高壓蒸汽滅菌法,在 121℃、103.4kPa 壓力下滅菌 15 - 20 分鐘;接種環和移液槍頭可使用干熱滅菌或濕熱滅菌的方式進行滅菌,確保實驗過程中不會引入雜菌,保證微生物培養的純度和準確性。

(二)培養基的制備

  1. 溶解操作:根據實驗需求,準確稱量所需量的 PDB 培養基干粉,放入無菌的容器中,加入適量的蒸餾水或去離子水。按照產品說明書的要求,使用磁力攪拌器或玻璃棒不斷攪拌,同時進行加熱(可采用水浴加熱或電爐加熱,但需注意加熱溫度不宜過高,避免培養基成分被破壞),直至培養基溶解,形成均勻的液體。在加熱溶解過程中,要防止培養基溢出或燒焦,若使用電爐加熱,需有人全程值守,攪拌頻率適中,確保培養基受熱均勻。

  2. 分裝與滅菌:將溶解后的培養基趁熱分裝到無菌的培養瓶或培養皿中。分裝時要注意控制分裝量,避免過多或過少影響微生物的生長空間和營養供給。分裝完成后,立即對培養基進行高壓蒸汽滅菌,一般在 121℃、103.4kPa 壓力下滅菌 15 - 20 分鐘,以殺滅培養基中可能存在的微生物和芽孢,保證培養基的無菌狀態。滅菌結束后,讓培養基在滅菌鍋內自然冷卻,待壓力降至零后,打開鍋蓋取出培養基,放置在無菌環境中備用。

(三)微生物接種與培養

  1. 無菌操作:在接種微生物時,必須嚴格遵循無菌操作原則。在超凈工作臺或無菌室內進行操作,提前打開紫外燈對操作區域進行滅菌 30 分鐘左右,關閉紫外燈后,打開風機,讓空氣流通一段時間,確保操作區域達到無菌狀態。操作過程中,雙手要用 75% 的酒精棉球擦拭消毒,接種環在使用前后都需在酒精燈火焰上灼燒滅菌,待冷卻后再進行接種操作,避免高溫殺死接種的微生物。

  2. 接種方法選擇:根據不同的微生物種類和實驗目的,選擇合適的接種方法,如劃線接種法、涂布接種法、傾注接種法等。劃線接種法適用于分離純化微生物,通過在培養基表面連續劃線,使微生物逐漸稀釋,形成單個菌落;涂布接種法常用于將菌液均勻分布在培養基表面,適合于菌落計數等實驗;傾注接種法則是將菌液與冷卻至適當溫度的培養基混合后倒入培養皿中,適用于厭氧菌的培養等。

  3. 培養條件控制:接種后的培養基應放置在適宜的培養環境中進行培養。不同的微生物對培養溫度、濕度和時間的要求各不相同,需根據微生物的特性進行調整。例如,真菌的培養溫度一般在 25 - 30℃,培養時間通常為 2 - 7 天;細菌的培養溫度和時間則因菌種而異,如大腸桿菌可在 37℃培養 18 - 24 小時。在培養過程中,要定期觀察微生物的生長情況,記錄菌落的形態、顏色、大小等特征,及時發現問題并進行處理,如出現污染現象,應立即停止培養并對相關器具和環境進行消毒處理。


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