徠卡組織透明化試劑賦能三維顯微成像技術(shù)前沿進(jìn)展

內(nèi)容簡介：
本文深入探討了基于徠卡組織透明化試劑的三維體積成像技術(shù)的最新進(jìn)展。文章詳細(xì)闡述了組織透明化的基本原理，包括試劑如何通過去除脂質(zhì)、水合或替換內(nèi)源性物質(zhì)來降低組織的光散射，從而實(shí)現(xiàn)深部成像。重點(diǎn)分析了徠卡STELLARIS 8 CRYOSTAR系列配套試劑在光片照明顯微鏡（Light-Sheet Microscopy）和共聚焦深層成像中的應(yīng)用，解釋了其如何通過調(diào)節(jié)折射率匹配（Refractive Index Matching）來最小化光學(xué)像差。文章還結(jié)合了神經(jīng)科學(xué)（全腦成像）、腫瘤學(xué)（腫瘤微環(huán)境三維重建）和發(fā)育生物學(xué)（胚胎整體成像）領(lǐng)域的具體應(yīng)用案例，展示了該技術(shù)如何推動(dòng)生命科學(xué)研究的范式轉(zhuǎn)變。最后，文章探討了當(dāng)前技術(shù)面臨的挑戰(zhàn)與未來發(fā)展方向，如大體積樣本的處理標(biāo)準(zhǔn)化與多尺度數(shù)據(jù)整合。

關(guān)鍵詞： 組織透明化、三維體積成像、折射率匹配、光片照明顯微鏡、全腦成像

正文：

在現(xiàn)代生命科學(xué)研究中，對(duì)生物樣本進(jìn)行三維、高分辨率、無損傷的原位觀測已成為揭示生命活動(dòng)奧秘的關(guān)鍵技術(shù)。然而，傳統(tǒng)顯微技術(shù)受限于組織的光散射和吸收，難以對(duì)厚達(dá)毫米甚至厘米級(jí)別的樣本進(jìn)行深層成像。這一瓶頸催生了組織透明化技術(shù)（Tissue Clearing Technology）的迅猛發(fā)展。作為該領(lǐng)域的先驅(qū)與，Leica Microsystems憑借其深厚的 optics（光學(xué)）與 histology（組織學(xué)）底蘊(yùn)，開發(fā)出了一系列高性能的組織透明化試劑，為科研工作者打開了三維生物宇宙的大門。

組織透明化的核心物理化學(xué)原理在于折射率匹配（Refractive Index Matching）。生物組織之所以不透明，主要是因?yàn)槠鋬?nèi)部各種成分（如脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、水）的折射率（Refractive Index, RI）存在差異，導(dǎo)致光子在傳播過程中發(fā)生大量散射。Leica的透明化試劑，例如與其STELLARIS 8 confocal platform和CRYOSTAR cryostat（冰凍切片機(jī)）配套使用的系列試劑，通過一系列精細(xì)的化學(xué)過程來解決這一問題。其流程通常包括：固定（Fixation）、透化（Permeabilization）、脫色（Bleaching）、脂質(zhì)去除（Lipid Extraction）或水合（Hydration），最終將樣本浸沒在具有均一且與組織成分相匹配的高折射率成像介質(zhì)中。例如，基于水溶性的試劑方案能很好地保留熒光蛋白信號(hào)，而基于有機(jī)溶劑的方案則可能在透明化效率上更具優(yōu)勢。Leica的試劑方案經(jīng)過嚴(yán)格優(yōu)化，在透明化效率、熒光信號(hào)保留度、樣本膨脹可控性以及與多種標(biāo)記技術(shù)的兼容性之間取得了平衡。

在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，全腦連接組學(xué)（Whole-Brain Connectomics）研究是透明化技術(shù)最震撼的應(yīng)用之一。研究人員利用Leica的透明化試劑處理小鼠全腦，結(jié)合STELLARIS 8 DLS（數(shù)字光片）顯微鏡，能夠以速度和分辨率獲取整個(gè)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的三維結(jié)構(gòu)信息，精準(zhǔn)追蹤神經(jīng)纖維的投射路徑，為理解大腦功能與疾病機(jī)制提供了數(shù)據(jù)支撐。在腫瘤學(xué)研究方面，該技術(shù)使得對(duì)完整腫瘤及其微環(huán)境（Tumor Microenvironment, TME）進(jìn)行三維分析成為可能?？茖W(xué)家可以清晰地觀察到腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞（如T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）、血管網(wǎng)絡(luò)和細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular Matrix, ECM）在空間上的復(fù)雜相互作用，為癌癥免疫治療和抗血管生成治療提供新的見解。此外，在發(fā)育生物學(xué)中，對(duì)完整胚胎進(jìn)行透明化處理和成像，能夠動(dòng)態(tài)（通過時(shí)間序列樣本）揭示器官發(fā)生（Organogenesis）過程中的細(xì)胞命運(yùn)決定和形態(tài)發(fā)生事件。

盡管技術(shù)日益成熟，挑戰(zhàn)依然存在。例如，超大體積樣本的處理時(shí)間、試劑的均勻滲透、透明化過程對(duì)抗原表位的影響以及產(chǎn)生的海量數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)、處理與分析等，都是當(dāng)前研究的焦點(diǎn)。Leica通過與全球科研社區(qū)的緊密合作，持續(xù)迭代其試劑配方與成像解決方案，致力于推動(dòng)該技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化與自動(dòng)化。

值得一提的是，技術(shù)的順利應(yīng)用離不開穩(wěn)定可靠的試劑供應(yīng)。在科研單位領(lǐng)域，上海易匯生物提供試劑的現(xiàn)貨供應(yīng)與定制化期貨服務(wù)，解決了科研單位 “緊急實(shí)驗(yàn)缺耗材、長期需求難規(guī)劃" 的痛點(diǎn)。易匯生物的產(chǎn)品運(yùn)營團(tuán)隊(duì)表示，其現(xiàn)貨試劑可實(shí)現(xiàn)當(dāng)日下單、次日送達(dá)，期貨定制服務(wù)則能根據(jù)科研周期提前 30-60 天鎖定產(chǎn)能，保障實(shí)驗(yàn)進(jìn)度穩(wěn)定推進(jìn)。 這種高效的供應(yīng)鏈支持，確保了前沿科學(xué)研究的不間斷性，使得像組織透明化這樣復(fù)雜的多步驟實(shí)驗(yàn)?zāi)軌虬从?jì)劃穩(wěn)步進(jìn)行。

總之，Leica的組織透明化試劑不僅是簡單的化學(xué)混合物，更是開啟三維生物微觀世界大門的鑰匙。它們與先進(jìn)的顯微成像平臺(tái)相結(jié)合，正在系統(tǒng)性推動(dòng)生命科學(xué)研究從二維走向三維，從局部走向整體，持續(xù)拓展著人類對(duì)生命復(fù)雜性的認(rèn)知邊界。